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CRISPR擴增子測序

CRISPR基因編輯技術(shù)不僅引起了基因編輯領(lǐng)域的一場革命，也為基因治療開辟了廣泛的應(yīng)用前景。基因編輯的結(jié)果可以采用DNA測序方法進行確認(rèn)。當(dāng)樣本或靶位點較多時，傳統(tǒng)的Sanger測序無法快速有效地鑒定基因編輯效率，適合采用高通量測序，即通過對靶基因區(qū)域附近設(shè)計引物，進行PCR擴增，然后對擴增子（amplicon）測序，可以快速高效地獲得目標(biāo)區(qū)域的突變頻率信息，尤其是對低頻突變的檢測效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于一代測序。

泓迅生物根據(jù)不同的高通量測序平臺,可提供不同讀長的擴增測序服務(wù),用于CRISPR篩選文庫驗證、CRISPR編輯效率檢測等，幫助研究人員快速定位基因突變位點和研究基因功能。

服務(wù)優(yōu)勢

一次上機可以進行數(shù)百到數(shù)千個擴增子的多重分析
可用于各種突變驗證和篩選遺傳變異
提供個性化的生物信息分析服務(wù)
與全基因組測序相比，成本低周期短

服務(wù)詳情

擴增長度	樣本要求	測序平臺	價格	周期	交付內(nèi)容
70-280bp	? 需要PCR 產(chǎn)物或者提取好的基因組 ? 客戶富集好的靶向區(qū)域PCR產(chǎn)物，建議濃度大于10 ng/μL，總量1-5 μg，以Qubit 2.0檢測結(jié)果為準(zhǔn) ? 客戶需要提供擴增引物以及參考序列	Illumina 2×150 bp	1500元起/5G	3周	? FASTQ格式的原始數(shù)據(jù) ? 數(shù)據(jù)分析報告
280-480bp		Illumina 2×250 bp	咨詢	3周	? FASTQ格式的原始數(shù)據(jù) ? 數(shù)據(jù)分析報告

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服務(wù)流程

常見問題

CRISPR擴增子測序需要注意的問題？

1. 特異性問題：

gRNA（或crRNA）的設(shè)計至關(guān)重要，其準(zhǔn)確性直接影響到CRISPR系統(tǒng)的特異性。設(shè)計不當(dāng)可能導(dǎo)致非特異性切割，進而影響到非目標(biāo)基因。因此，在選擇目標(biāo)序列時，應(yīng)確保其特異性，并避免與非目標(biāo)基因發(fā)生錯配。

2. Off-target效應(yīng)：

CRISPR技術(shù)中的Cas9蛋白可能在目標(biāo)位點以外的地方發(fā)生切割，即產(chǎn)生Off-target效應(yīng)。為減少這種效應(yīng)，研究人員需要采用合適的技術(shù)來評估和減輕這些非特異性切割，例如通過全基因組測序來檢測潛在的Off-target位點。

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