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穩(wěn)定細胞株構(gòu)建

穩(wěn)定細胞株構(gòu)建是指將外源DNA克隆到具有某種抗性或者選擇基因的載體上，轉(zhuǎn)染宿主細胞后，利用載體中所含的選擇標(biāo)志進行篩選，得到可穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株。

泓迅生物提供一系列穩(wěn)定細胞株構(gòu)建服務(wù)，用于全長抗體及抗體片段、Fc融合蛋白、多種細胞表面受體、胞質(zhì)和分泌蛋白等重組蛋白/抗體的穩(wěn)定及規(guī)?；a(chǎn)。

服務(wù)優(yōu)勢

從基因合成到篩選，提供全流程服務(wù)
CHO1.0穩(wěn)轉(zhuǎn)載體，配合嘌呤霉素+MTX篩選系統(tǒng)
高效穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及Pool篩選
可對重組蛋白/抗體全長或片段進行個性化表達

服務(wù)詳情

服務(wù)項目	服務(wù)詳情	項目周期	交付內(nèi)容
基因合成	全基因合成，提供表達載體	2-3周	√ 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株pool √ 項目報告
小量表達分析鑒定	質(zhì)粒小量抽提，鑒定，轉(zhuǎn)染CHO細胞，分析表達量，純化，活性與純度檢測	2周
minipool篩選 (>0.2g/L)	1. 電轉(zhuǎn)后進行加壓篩選； 2. 孔板篩選與擴增實驗數(shù)據(jù)； 3. minipool產(chǎn)量檢測實驗數(shù)據(jù)； 4. Top12候選株Fed-Batch（不少于10天）抗體表達30ml； 5. Top3候選與建庫；	7-12周
單克隆篩選	1. 有限稀釋單克隆篩選； 2. 產(chǎn)量檢測； 3. 細胞過程培養(yǎng)實驗數(shù)據(jù)； 4. 單克隆篩選過程記錄數(shù)據(jù)； 5. Top25單克隆Fed-Batch（不少于10天）抗體表達30ml； 6. Top3候選單克隆建庫； 7. 單克隆不低于0.5g/L表達水平，三代穩(wěn)定性；	6-10周

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服務(wù)流程

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我們通過 PvuI 線性化質(zhì)粒、電轉(zhuǎn) CHO 細胞、L-MSX 篩選和高通量ELISA鑒定，成功獲得一株表達量達0.8 g/L、活性優(yōu)良（EC50=0.004）的穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆 2B1。該細胞株經(jīng) Fed-batch 培養(yǎng)驗證，表現(xiàn)出良好的生長穩(wěn)定性和表達一致性。

ELISA 陽性克隆篩選：鑒定出80%以上為陽性克隆，其中 2B1 克隆表達量最高。

Fed-batch 培養(yǎng)：通過優(yōu)化補料策略，最終表達量達到0.8 g/L。

活性驗證：穩(wěn)轉(zhuǎn)株抗體活性（EC50=0.004）與瞬轉(zhuǎn)株（EC50=0.003）相當(dāng)，表明穩(wěn)轉(zhuǎn)株具有良好的功能活性。

常見問題

構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株有必要嗎？

如果您需要對過表達或者表達降低目的基因的細胞進行反復(fù)試驗，那么構(gòu)建穩(wěn)定細胞株是有必要的。
第一，可以減少不同批次實驗中轉(zhuǎn)染效率差異帶來的實驗結(jié)果差異，提高實驗的可重復(fù)性。
第二，構(gòu)建好細胞系后不必再進行瞬時轉(zhuǎn)染實驗以及反復(fù)制備質(zhì)粒，減少工作量。
第三，不再使用價格高昂的轉(zhuǎn)染試劑，節(jié)約實驗成本。

所有細胞株都可以構(gòu)建穩(wěn)定細胞系嗎？

不是所有的細胞株都能構(gòu)建成為穩(wěn)定細胞系的。構(gòu)建穩(wěn)定細胞系需要滿足2個條件：

1、細胞能穩(wěn)定傳代；

2、細胞的轉(zhuǎn)染效率滿足要求。

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