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核酸探針可以應用在哪些技術平臺中？

在分子生物學研究與診斷領域，核酸探針是實現(xiàn)高特異性靶標檢測不可或缺的工具。利用核酸探針，可以檢測目標基因是否存在，以及存在的數(shù)量、位置，可以應用在生命科學、臨床醫(yī)學領域，實現(xiàn)疾病機制研究、疾病診斷與治療。其核心價值正是通過多種成熟且強大的技術平臺得以實現(xiàn)，這些平臺利用核酸探針的特異性雜交能力，在具體實驗場景中服務于不同的研究或診斷目標。

• 分子雜交(Southern/Northern blot, FISH)：利用標記探針直接雜交固定核酸，用于基因定位、拷貝數(shù)分析、RNA時空表達研究。

• 實時熒光定量PCR (qPCR)：以水解探針為代表，依賴聚合酶外切酶活性水解探針釋放熒光信號，實現(xiàn)核酸靶標的精確定量。

• 原位雜交(ISH/FISH)：探針與細胞/組織原位核酸雜交，結合顯微成像，在單細胞水平檢測基因定位、染色體異常及微生物。

• 微陣列/基因芯片：固相支持物上點樣高通量探針，通過雜交信號進行基因表達譜分析、基因分型與突變篩查。

• NGS靶向富集：利用探針池雜交捕獲目標序列（如外顯子組、基因Panel），顯著提高NGS測序深度與效率。

在眾多應用場景中，實時熒光定量PCR (qPCR)因其高靈敏度、快速、定量準確等優(yōu)勢，成為核酸探針應用最為廣泛的技術平臺之一。因此，針對qPCR探針的設計與選擇尤為關鍵。

qPCR探針該如何選擇？

01. 成本

考慮降低成本的情況，水解探針和蝎形探針是很好的選擇。與目前市面上所有的熒光探針相比，水解探針是目前市場上可靠，而且便宜的一種，如TaqMan和MGB探針。蝎形探針由于引物的發(fā)卡結構，不需要開發(fā)和購買單獨的探頭，成為一個方便且具成本效益的選擇。

02. 時間

考慮時間的情況，蝎形探針是首選解決方案。不僅引物和探針存在于一個發(fā)卡結構分子上，而且可以在快速循環(huán)條件下工作。水解探針也是理想的，因為它們非?？煽?，問題發(fā)生頻次最低。這些往往被廣泛用于高通量擴增分析。

03. 特異性

如果目標序列很少，可以考慮分子信標探針和雙雜交探針。當結合到目標時，分子信標探針發(fā)射的熒光量通常比在自由溶液中釋放的光量大100倍。雙雜交探針有兩個探針與擴增產(chǎn)物雜交，可以有更高的特異性。

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相同樣品，經(jīng)泓迅生物升級工藝處理后，進一步分離出雜質(zhì)（O），得到高純度目標探針產(chǎn)物（☆）

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