A：重組蛋白是存在不表達的風(fēng)險的，可能與蛋白自身性質(zhì)有關(guān)，比如膜粘連蛋白、植物來源的蛋白，或者分子量過大或過小的蛋白、毒性蛋白等。

A：重組蛋白是存在不表達的風(fēng)險的，可能與蛋白自身性質(zhì)有關(guān)，比如膜粘連蛋白、植物來源的蛋白，或者分子量過大或過小的蛋白、毒性蛋白等。

A：可能是有的，理論上可能沒有上清蛋白活性好。

A：優(yōu)先親和純化，如果要求進行凝膠過濾層析，離子交換層析等，需要額外收費。

A：HIS/GST/MBP/Flag/Fc，其中Flag填料成本較高，需要額外收費。

A：原核系統(tǒng)可以使用pet-duet-1載體，分別在兩個MSC區(qū)構(gòu)建目的蛋白；

昆蟲系統(tǒng)可以使用pFastBacDual載體，插入一條目的序列后，需反向互補后，再插入另一條序列。

哺乳系統(tǒng)可以構(gòu)建兩個質(zhì)粒，一起轉(zhuǎn)染，載體和細胞沒有要求。

酵母系統(tǒng)可以構(gòu)建兩個質(zhì)粒，pPIC9質(zhì)粒先轉(zhuǎn)化GS115菌株，檢測蛋白若有表達， 將GS115制備成感受態(tài)再轉(zhuǎn)入pPICZ質(zhì)粒。

A：增加孵育時間：給予蛋白與填料足夠的結(jié)合時間；增加填料體積：增加蛋白與填料之間碰撞幾率，從而提高結(jié)合效率。

A：純化過程中提高緩沖液鹽離子濃度（<2M）助溶；添加DTT（<100mM）打開二硫鍵，防止蛋白形成聚體導(dǎo)致沉淀；添加甘油或蔗糖（5%-10%）等保護劑。

A：液體或者凍干發(fā)貨。

A：sumo酶切、TEV酶切、3C酶切（優(yōu)先SUMO酶切）。

A：可以從以下幾個方面進行嘗試：

更換不同的信號肽進行嘗試；

在目的序列N端添加大標簽，如MBP/Fc等，MBP在真核系統(tǒng)中可能不掛柱，還需要融合其他標簽用于純化，F(xiàn)c標簽可以用于純化。